Infección experimental en ovinos con el virus de leucosis bovina: dosis mínima de células BLV-FLK y virus libre de células, y actividad neutralizante de anticuerpos naturales / Experimental infection of sheep with Bovine leukemia virus (BLV): Minimum dose of BLV-FLK cells and cell-free BLV and neutralization activity of natural antibodies

Abstract Bovine leukemia virus (BLV) is an important cattle pathogen that causes major economic losses worldwide, especially in dairy farms. The use of animal models provides valuable insight into the pathogenesis of viral infections. Experimental infections of sheep have been conducted using blood from BLV-infected cattle, infectious BLV molecular clones or tumor-derived cells. The Fetal Lamb Kidney cell line, persistently infected with BLV (FLK-BLV), is one of the most commonly used long-term culture available for the permanent production of virus. FLK-BLV cells or the viral particles obtained from the cell-free culture supernatant could be used as a source of provirus or virus to experimentally infect sheep. In this report, we aimed to determine the minimum amount of FLK-BLV cells or cell-free supernatant containing BLV needed to produce infection in sheep. We also evaluated the amount of antibodies obtained from a naturally-infected cow required to neutralize this infection. We observed that both sheep experimentally inoculated with 5000 FLK-BLV cells became infected, as well as one of the sheep receiving 500 FLK-BLV cells. None of the animals inoculated with 50 FLK-BLV cells showed evidence of infection. The cell-free FLK-BLV supernatant proved to be infective in sheep up to a 1:1000 dilution. Specific BLV antibodies showed neutralizing activity as none of the sheep became infected. Conversely, the animals receiving a BLV-negative serum showed signs of BLV infection. These results contribute to the optimization of a sheep bioassay which could be useful to further characterize BLV infection.

Resumen El virus de la leucosis bovina (bovine leukemia virus [BLV]) es un importante agente patógeno del ganado que causa importantes pérdidas económicas en todo el mundo, especialmente en los rodeos lecheros. El uso de modelos animales proporciona información valiosa sobre la patogénesis de las infecciones virales. Se realizaron infecciones experimentales en ovejas usando sangre de bovinos infectados con BLV, clones moleculares de BLV infecciosos o células derivadas de tumores. La línea celular Fetal Lamb Kidney, persistentemente infectada con el BLV (FLK-BLV), es uno de los cultivos a largo plazo más utilizados para la producción permanente de virus. Las células FLK-BLV o las partículas virales obtenidas del sobrenadante del cultivo libre de células podrían usarse como fuente de provirus o de virus para infectar experimentalmente ovejas. En este trabajo, nuestro objetivo fue determinar la cantidad mínima de células FLK-BLV o de sobrenadante libre de células que contiene BLV necesaria para producir infección en ovejas. También evaluamos la cantidad de anticuerpos bovinos anti-BLV necesaria para neutralizar la infección. Observamos que las dos ovejas inoculadas experimentalmente con 5000 células FLK-BLV se infectaron, y que una de las dos ovejas que recibieron 500 células FLK-BLV se infectó. Ninguno de los animales inoculados con 50 células FLK-BLV mostró evidencia de infección. El sobrenadante FLK-BLV libre de células demostró ser infectivo en ovejas hasta la dilución 1:1000. Los anticuerpos BLV específicos mostraron actividad neutralizante, ya que ninguna de las ovejas se infectó. Por el contrario, los animales que recibieron un suero BLV negativo mostraron signos de infección por BLV. Estos resultados contribuyen a la optimización de un bioensayo en ovejas útil para caracterizar la infección por BLV.

Valores de referência e influência da idade no eritrograma de fêmeas bovinas da raça Aquitânica / Reference values and age effect on the erythrogram of bovine females of the Aquitanian breed

Determinaram-se os valores de referência e estudou-se a influência da idade sobre o eritrograma em fêmeas bovinas da raça Aquitânica. Amostras de sangue de 80 fêmeas bovinas, acima de 12 meses de idade, e não reagentes ao antígeno do vírus da leucose dos bovinos, foram colhidas utilizando-se EDTA como anticoagulante para realização das seguintes provas: contagem global das hemácias, determinação do volume globular, concentração de hemoglobina, cálculo dos índices hematimétricos absolutos - volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM). A idade exerceu influência significativa (P<0,05) sobre a maioria dos parâmetros hematológicos estudados, com diminuição da quantidade de hemácias e aumento do volume globular, quantidade de hemoglobina, VCM e HCM. Os valores foram: hemácias 6,68±0,58×10(6)/mm³, volume globular 41,2±4,5 por cento, hemoglobina 12,8±1,31g/dl, VCM 61,83±6,54fl, HCM 19,28±2,25pg, CHCM 31,4±2,3 por cento.

The reference values and the influence of the age factor on the erytrogram in bovine females of the Aquitanian breed were evaluated. Blood samples of 80 healthy females, all tested negative for bovine leucose virus, were utilized for the analysis. Erythrocyte counts, determination of the packed cell volume, concentration of hemoglobin, calculation of hematimetric absolute rates of mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin (MCH) and mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) were evaluated. Significant influence (P<0.05) of age was observed for most of the hematological characteristics, with decreased of the number of erythrocytes and increase of packed cell volume, quantity of hemoglobin, MCV, MCH. The reference values were: erythrocytes counting 6.68±0.58×10(6)/mm³, packed cell volume 41.2±4.5 percent, hemoglobin 12.8±1.31g/dl, VCM 61.83±6.54fl, HCM 19.28±2.25pg, CHCM 31.4±2.3 percent.

Infecção pelo vírus da leucose enzoótica bovina (BLV) / Enzootic bovine leukosis infection (BLV)

O vírus da leucose bovina (BLV) é o agente causal de duas condiçöes clínicas relacionadas aos bovinos: o linfossarcoma, doença neoplásica comum no gado adulto, e linfocitose persistente, proliferaçäo benígna das células linfóides. A identificaçäo do BLV em 1969 e o subseqüente desenvolvimento de técnicas sorológicas sensíveis permitiram o reconhecimento da infecçäo como prevalente em muitos países, principalmente no gado leiteiro. Devido a inexistência de tratamento ou de uma vacina eficaz, as pesquisas concentram-se nos modos de transmissäo e no desenvolvimento de programas de controle e prevençäo da infecçäo. Este trabalhlo faz uma revisäo bibliográfica sobre o BLV, incluindo modos de infecçäo, sinais clínicos e diagnóstico laboratorial, além de descrever medidas que o produtor deve seguir para prevenir ou controlar a disseminaçäo do vírus no rebanho.

Avaliaçäo de métodos de controle da infecçäo pelo vírus da leucose enzoótica bovina / Appraisal methods for controlling the infection by enxootic bovine leukosis

Foram avaliadas três alternativas de controle da infecçäo pelo vírus da Leucose Bovina: a) eliminaçäo dos animais soropositivos; b) segregaçäo dos animais soropositivos; c) manejo misto dos animais, com adoçäo de medidas recomendadas para evitar a transmissäo do vírus. O primeiro teste sorológico realizado em oito propriedades leiteiras revelou a presença da infecçäo com índices que variaram entre 2,5 porcento (1/40) e 58,1 porcento (18/31).Duas propriedades com baixo nível de infecçäo inicial (<10 porcento) optaram pela eliminaçäo total dos animais positivos. Uma dessas propriedades apresentou resultados imediatos, com taxa de incidência nula (0/39) durante o período de doze meses, enquanto a outra, que näo eliminou prontamente o animal positivo, apresentou incidência de 20,0 porcento (3/15) no mesmo período. A eliminaçäo dos animais reagentes, nas propriedades que apresentaram um baixo nível de infecçäo, demonstrou ser uma forma eficiente para a erradicaçäo da infecçäo. A segregaçäo dos animais soropositivos, com a formaçäo de dois rebanhos, foi implantada em uma propriedade, onde apenas um animal soroconverteu durante o experimento, observando-se uma incidência de 4,5 porcento (1/22) ao final do estudo. As propriedades que adotaram o programa de controle através do manejo misto de animais infectados e näo infectados apresentaram resultados muito variados, demonstrando índices de soroconversäo entre 2,6 porcento (1/38) a 50,0 porcento (4/8), indicando que esse tipo de controle necessitaria de um tempo maior para alcançar os objetivos. Foi possível a obtençäo de descendentes soronegativos através da substituiçäo ou inativaçäo pelo calor do leite materno administrado aos terneiros. A reduçäo dos níveis de infecçäo em um rebanho, sem a necessidade do descarte imediato os animais infectados, é possível a partir da substituiçäo de ventres pelas novilhas da própria granja.